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蛋白表達增強型轉染試劑 6.0mL

GeneTran II是一種新型的脂質體和多聚物轉染試劑,可用于各種真核細胞系的質粒轉染,如HEK293、CHO、COS、NIH3T3、MCF-7、PC12、RKO、C2C12、鼠胚胎干細胞和纖維原細胞、間質干細胞、NCCIT、果蠅細胞。同時原代細胞也能轉染,如人腫瘤細胞、大鼠腎上腺嗜鉻細胞、大鼠和小鼠皮質神經細胞、肝細胞等。
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產品名稱 :

 Transfection Reagent for Transient Protein Expression

蛋白表達增強型轉染試劑

品牌 :

 BIOMIGA

貨號 :

 GT1212-01

規格 :

 0.5mL/1.0mL/1.5mL/6.0mL

詳細信息 :

 

說明 :

可用于150次6-孔板或3.5mm培養皿的細胞轉染。
 

產品說明

 

GeneTran II是一種新型的脂質體和多聚物轉染試劑,可用于各種真核細胞系的質粒轉染,如HEK293、CHO、COS、NIH3T3、MCF-7、PC12、RKO、C2C12、鼠胚胎干細胞和纖維原細胞、間質干細胞、NCCIT、果蠅細胞。同時原代細胞也能轉染,如人腫瘤細胞、大鼠腎上腺嗜鉻細胞、大鼠和小鼠皮質神經細胞、肝細胞等。對于懸浮細胞也有較高的轉染效率和較低的毒性,如HEK 293、小鼠淋巴細胞、昆蟲細胞(sf9, sf21, High-Five)。有無血清存在(0-20%)對轉染試劑的效果無影響。

 

主要特點

 

高效轉染各種貼壁細胞。

對胚胎干細胞和原代細胞有較高的轉染效率。

對懸浮細胞如HEK293和sf9、sf21、high-five等昆蟲細胞也有很高的轉染效率。

在同類產品中具有更高的轉染效率和更低的毒性。

有無血清存在(0-20%)對轉染試劑的效果無影響。

可用于單個質?;蚨鄠€質粒共轉。

轉染24-72小時后,有高的蛋白表達量。

性價比高

操作簡便

 

保存條件

 

GeneTran 可在4℃(切勿放-20℃)至少保存18個月。使用之前請先將試劑瞬時離心。

 

質粒轉染步驟

 

以下步驟是用于35mm培養皿或6孔培養板轉染真核細胞的。若用于其他規格培養皿的轉染,請參考表1的用量。所有的數據和體積都是每孔的用量。對于絕大多數的細胞系和原代細胞,質粒DNA和GeneTran的比例按1:2-1:3混合。轉染HEK293細胞可只按1:1混合。有時優化條件也是必須的(參見質粒DNA轉染條件的優化,第7頁)。

 

A. 轉染貼壁細胞(35 mm培養皿或6孔培養板)

轉染前一天鋪板使轉染時細胞達到60-70%的匯合度。

1. 對于每一個轉染樣本,按如下比例配制轉染混合液:

2.5 μg    質粒DNA

5 μL       GeneTran

x μL       無血清DMEM(或其他無血清培養基, PBS, DPBS等)

              總體積100 μL

* 不能在轉染混合液中混有Opti-MEM和血清

2. 用槍頭吹打混勻,放置于室溫20-40min。

 

3. 將混合液加入1 μL Reagent B,混勻后,加入到細胞培養皿中,晃動培養皿混勻培養液。放入CO2培養箱。

 

注:血清濃度對于轉染效果無影響,經測試高達20%的胎牛血清濃度也不會對轉染效果產生影響。

 

4. 在轉染后的18-48小時之間,對細胞進行換液。轉染18-48小時之后可 檢測基因表達。如果檢測到蛋白表達,請在轉染后4-5天收集培養液。

 

5. 如果要得到穩定細胞株,請在轉染24小時后按1:10傳代培養。

 

 

B. 轉染懸浮細胞(35 mm培養皿或6孔培養板)

轉染時保證細胞超過90%的密度

1. 對于每一個轉染樣本,按如下比例配制轉染混合液:

2.5 μg    質粒DNA

5 μL       GeneTran

X μL       無血清DMEM(或其他無血清培養基, PBS, DPBS等)

              總體積100 μL

*  不能在轉染混合液中混有Opti-MEM和血清

 

2. 槍頭吹打混勻,放置于室溫20-40分鐘。

 

3. 將混合液加入1 μL Reagent B,混勻后,加入到細胞培養皿中,晃動培養皿混勻培養液。放入CO2培養箱。

 

注:血清濃度對于轉染效果無影響,經測試高達20%的胎牛血清濃度也不會對轉染效果產生影響。

 

4. 在轉染后的18-48小時之間,對細胞進行換液。轉染18-48小時之后可檢測基因表達。如果有蛋白表達,請在轉染后4-5天收集培養液。

 

5. 如果要得到穩定細胞株,請在轉染24小時后按1:10傳代培養

 

表1各種細胞培養板轉染推薦用量

 

培養皿/板

表面積(cm2

培養液(mL)

混合液(μL)

質粒(μg)

GeneTran

10cm

56

10

500

10

20-30 µL

60mm

21

3

150

3

6-9 µL

35mm

8

2

100

2.5

5-7.5 µL

6孔

9.5

2

100

2.5

5-7.5 µL

12孔

3.8

1

50

1

2-3 µL

24孔

1.9

0.5

25

0.5

1-1.5 µL

48孔

0.95

0.25

12.5

0.25

0.5-0.75 µL

96孔

0.32

0.1

5

0.1

0.2-0.3 µL

 

質粒轉染條件優化

 

前面介紹的轉染步驟是針對一般比較好轉的細胞。

對于C2C12肌肉細胞系,FuGENE-6 和Lipofectamine-2000的轉染效率不到10%,而GeneTran按照下面的體系轉染效率可達70%:

 

 

     6 μg       質粒DNA

12-18 μL     GeneTran

        X μL    無血清DMEM(或其他無血清培養基, PBS, DPBS等)

                   總體積100 μL

 

對于其他細胞系,可參考以下方法優化條件:

A. 在35mm培養板中將質粒量增加到3μg,4μg和6μg。

B. 在35mm培養板中將GeneTran增加到15μL。

C. 如果轉染效率較高,但死細胞較多,可降低質粒量到1μg或更低。也可以減少孵育時間到5-24小時。

D. 可按下表優化條件:

   

問題

DNA

GeneTran

細胞毒性

降到1-2 μg

降到2-3 μL

轉染效率低

對于難轉的細胞增加到4μg

增加到>1:4

對于特別難轉的細胞增加到6μg

增加到>1:4



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