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淋巴細胞分離液操作步驟是哪些?

2021-10-31      86
  淋巴細胞分離液是一種用于分離人外周血淋巴細胞的無菌、低內毒素水平的密度梯度分離液。其分離原理是根據血細胞的密度差異,通過離心使一定密度的細胞按相應密度梯度分布,從而將淋巴細胞從人外周血或臍帶血中分離出來。淋巴細胞分離液操作步驟是哪些?
  使用操作步驟:
  (1)取新鮮抗凝全血或者去纖維蛋白血液,用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。
  (2)在離心管中加入適量分離液,將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方,注意保持兩液面界面清晰。
  (3)室溫,水平轉子500~1000g,離心20~30min。
  (4)離心后將出現明顯的分層:上層是稀釋的血漿層,中間是透明的分離液層,血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細胞層,離心管底部是紅細胞與粒細胞。
  (5)小心的吸取白膜層細胞到15mL潔凈的離心管中,10mLPBS或細胞洗滌液洗滌白膜層細胞。250g,離心10min。
  (6)棄上清,5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞,250g,離心10min。
  (7)重復步驟6;
  (8)棄上清,細胞重懸備用。
  淋巴細胞分離液的原理:
  外周血中單個核細胞和單核細胞,其體積、形態和密度與其他細胞不同.淋巴細胞分離液是一種密度介于1.075∽1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細胞按相應密度梯度分布,從而將各種血細胞加以分離。
  基本應用:
  可用于體外分離外周淋巴血細胞,也可以從其他來源中分離單核細胞,包括臍帶血細胞和骨髓細胞,適用于從血液及組織勻漿中分離所需細胞,在醫療和醫學生物中廣泛應用。其他人及動物多種比重細胞分離液。
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